目前實時熒光定量PCR已得到廣泛應(yīng)用，如擴(kuò)增特異性分析基因定量分析基因分型SNP分析等熒光定量PCR最常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBR Green I 的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法 SYBR Green I 的非特異性方；rtpcr和實時熒光定量pcr區(qū)別如下1所說的PCR應(yīng)該就是最常規(guī)的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實現(xiàn)DNA的擴(kuò)增2RTPCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCRreverse transcription，盡管有些資料上說實時熒光定量PCR也real。

Ct=1lg1+Ex*lgX0+lgNlg1+Exn為擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，X0為初始模板量，Ex為擴(kuò)增效率，N為熒光擴(kuò)增信號達(dá)到閾值強度時擴(kuò)增產(chǎn)物的量起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線；簡單來說，PCR技術(shù)就是將引物可以與DNA單鏈模板互補配對的一小段DNA寡核苷酸鏈模板dNTPsDNA ploymerase反應(yīng)BufferddH2O等配制成一個反應(yīng)體系，然后按照反應(yīng)所需要的溫度順序進(jìn)行溫控式執(zhí)行反應(yīng)經(jīng)過數(shù)十個循環(huán)。

rtpcr和實時熒光定量pcr區(qū)別就是過程不同，具體如下RTPCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR基本操作過程是將所提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計引物進(jìn)行擴(kuò)增，是一種檢測基因表達(dá)的常用方法實時熒光定量；目前，PCR成為分子生物學(xué)研究必不可少的一部分實時熒光定量PCRQuantitative Realtime PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對模板進(jìn)行定量分析的方法該項。

RealtimePCR是在PCR擴(kuò)增過程中，通過熒光信號，對PCR進(jìn)程進(jìn)行實時檢測由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。

熒光定量pcr的模板是什么意思

熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR，后來也叫RealTime PCR，是美國PEPerkin Elmer公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的一般而言，熒光擴(kuò)增。

熒光pcr法是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法也叫實時熒光定量PCR技術(shù)熒光PCR法技術(shù)原理將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后。

實時熒光定量PCR realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術(shù)，它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)。

RNA分子怎么能作為PCR模板呢PCR的酶是DNA聚合酶，需要用DNA為模板因此需要mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模板才能進(jìn)行PCR反應(yīng)。

實時熒光定量PCR 1996年，實時熒光定量PCR realtime quantitative polymerase chain reaction，Realtime qPCR 由美國Applied Biosystems公司首先推出，所謂Realtime qPCR是指在 PCR反應(yīng)中加入熒光基團(tuán) ，通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號。

熒光定量pcr的模板是什么材質(zhì)

1、熒光定量PCRRealtime PCR，是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，通過對擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法以探針法熒光定量PCR為例PCR擴(kuò)增時在加入一對引物。

2、基于以下的理論1每一個循環(huán)都會擴(kuò)增一倍 2引物擴(kuò)增的效率一致 所以，如果結(jié)果X循環(huán)，產(chǎn)物得到了2的X次方如果起始模板只有一半量，那產(chǎn)物就是2的x1次方如果起始模板的量是一倍，那產(chǎn)物就是2的x+1次方，以此類。

3、所以，如果結(jié)果X循環(huán)，產(chǎn)物得到了2的X次方如果起始模板只有一半量，那產(chǎn)物就是2的x1次方如果起始模板的量是一倍，那產(chǎn)物就是2的x+1次方，以此類推只要在產(chǎn)物指數(shù)增加的階段測量擴(kuò)增曲線，就可以計算出起始。

4、實時就是指每個階段的熒光都有收集，其實現(xiàn)在所有的熒光定量PCR儀器都是實時的熒光定量PCR的英文簡寫是FQPCR，F(xiàn)是熒光的縮寫，Q是定量的縮寫或者寫成是RTPCRRT就是realtime的縮寫做定量PCR的目的是為了了解起始。